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本试剂盒可以从各种原核细菌样本中提取总蛋白，提取过程简单方便。本试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白用于双向电泳。如需要用于报告基因检测、SDS-PAGE电泳检测、Western blotting、凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活分析等下游实验的试剂盒，请联系本公司选购其他货号的试剂盒。

• 蛋白酶抑制剂、提取液B未开封前也可以2～8℃保存。开盖使用后-20℃储存。
  
• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
  
• 本试剂盒提取的蛋白样本可直接用于2D电泳，也可根据需要进行TCA/丙酮沉淀处理后使用。详细步骤可联系本公司索取。

• 裂解液的准备：
  根据所需要提取的样本量，每500μL蛋白提取液中A加入5μL试剂B和2μL蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
  注：
  ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  
• 在12000×g条件下将菌液离心5min，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体，用PBS洗菌体2次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。
  
• 按每50～100mg湿重菌体样本加入500μL裂解液，吹打混匀，室温振荡30分钟～1小时。
  注：
  ● 选做步骤：300w，10s超声/10s间隔条件下冰浴超声至菌液变清。若不做，可延长裂解液作用时间至菌体完全裂解。
  ● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
  ● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
  
• 在12000×g条件下将提取液离心5分钟。
  
• 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到细菌总蛋白。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 建议用Bradford法或Lowry法进行蛋白定量。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。